I. Fonctionnement : Création d’un environnement anaérobie
1. Réglage de la pression de sortie des bouteilles d’azote et de gaz combiné : Réglez le détendeur à environ 0,1 MPa.
2. Mettez l’appareil sous tension et réglez le thermostat à la température souhaitée. La température à l’intérieur de l’incubateur, dans la chambre de culture, est réglable.
3. Placez les accessoires et équipements nécessaires, et insérez deux sacs plastiques non toxiques dans la chambre de culture.
4. Introduire 1000 g de granulés de palladium séchés (sous vide) et 500 g de dessiccant, ainsi qu'un indicateur d'anaérobie (sous vide), dans la chambre de travail.
5. Fermer hermétiquement les portes intérieure et extérieure de la chambre d'échantillonnage et effectuer un contrôle de vide.
6. Remplacement de l'azote dans la chambre de travail :
(1) Insérer un tube en caoutchouc dans l'entrée d'air de la chambre de travail et placer l'autre extrémité dans un sac plastique.
(2) Raccorder l'arrivée d'azote, ouvrir la vanne de régulation d'azote, remplir les deux sacs plastiques d'azote, puis fermer hermétiquement les ouvertures des sacs.
(3) Enfiler des gants en latex sur la bride du panneau d'observation et les serrer.
(4) Libérer progressivement l'azote des sacs plastiques dans la chambre de travail jusqu'à ce que tout l'azote soit libéré.
7. Remplacement de l'azote dans la chambre de travail : Répéter le remplissage d'azote en veillant à ouvrir et fermer régulièrement la vanne d'échappement.
8. Remplacement tertiaire du mélange gazeux dans la chambre opératoire :
(Composition du mélange gazeux : N₂ 90 % ; H₂ 5 % ; CO₂ 5 %).
(1) Modifier le circuit de gaz, ouvrir la vanne d’arrivée du mélange gazeux et ouvrir ou fermer la vanne d’échappement à tout moment pendant le remplissage.
(2) Une fois les sacs plastiques remplis de mélange gazeux, fermer la vanne de passage direct du mélange gazeux (vanne à trois voies).
(3) Libérer progressivement le mélange gazeux des sacs plastiques dans la chambre opératoire.
(4) Après trois renouvellements d’air, la teneur en oxygène dans la chambre opératoire est réduite à des traces.
9. Mettre en marche le capteur d’oxygène à granules de palladium dans la chambre opératoire et connecter l’alimentation électrique au dispositif de désoxygénation catalytique. Après une heure, observer le changement de couleur de la bandelette indicatrice d’anaérobiose. Un changement de couleur indique que la chambre opératoire est en milieu anaérobie.
10. Mettre en marche la lampe de stérilisation ultraviolette pour stériliser la chambre. La durée de stérilisation est déterminée par l'utilisateur.
II. Mise en place et culture des souches bactériennes
1. Vérifier et fermer la porte de la chambre d'échantillonnage.
2. Ouvrir la porte extérieure de la chambre d'échantillonnage, y introduire la souche bactérienne, puis refermer la porte.
3. Procéder à trois purges et renouvellements d'azote dans la chambre d'échantillonnage : tout d'abord, mettre sous vide jusqu'à un niveau de 500 mmHg (66 kPa) ou plus, puis ouvrir manuellement la vanne d'azote pour permettre à l'indicateur de revenir à zéro avant de passer à l'opération suivante.
4. Si un niveau de vide inférieur est sélectionné, le nombre de cycles de renouvellement doit être augmenté. 5. Après l'ouverture et la fermeture des portes de la chambre d'échantillonnage, appliquer un faible vide de 100 mmHg (13 kPa) pour les vérifications et le bon fonctionnement.
6. Conditions d'utilisation continue et prolongée de l'incubateur anaérobie :
(1) Observer quotidiennement l'indicateur d'anaérobiose dans la salle de prélèvement. Si les conditions sont normales, l'appareil peut continuer à être utilisé. Dans le cas contraire, l'air doit être renouvelé.
(2) Un faible débit de mélange gazeux doit être introduit en continu afin de permettre à l'hydrogène ajouté de se combiner aux traces d'oxygène pour une absorption catalytique, maintenant ainsi un milieu anaérobie. Le débit du mélange gazeux doit être d'environ 10 ml par minute.
(3) Remplacer le dessiccant tous les 3 jours d'incubation continue.
7. Utilisation du stérilisateur pour bâtonnets d'inoculation :
(1) Court-circuiter un fil chauffant en nickel-chrome et le chauffer à incandescence pour stériliser le bâtonnet d'inoculation.
(2) Appliquer directement la cire fondue sur le bâtonnet d'inoculation et faire tourner l'orifice de scellage du tube à essai pour faire fondre la cire.