PCR : Polymerase Chain Reaction, qui utilise l'ADN pour dérouler (dénaturer) in vitro à 95 ° C. A 55 ° C, les amorces et les simples brins sont combinés (hybridation) selon le principe de l'appariement complémentaire des bases, puis la température est ajustée à environ 72°C, l'ADN polymérase synthétise des brins complémentaires (s'étend) le long de la direction allant de l'acide phosphorique aux sucres à cinq carbones (5'-3').
L'instrument PCR est en fait un dispositif de contrôle de la température, qui peut bien contrôler la température entre 95 °C, 55 °C et 72 °C.
Selon l'objectif des normes d'amplification et de détection de l'ADN, les instruments PCR peuvent être divisés en : instruments PCR ordinaires, instruments PCR en gradient, PCR in-situ, instruments PCR quantitatifs fluorescents en temps réel, etc.
①Machine PCR ordinaire
Généralement, une machine PCR qui ne peut exécuter qu'une température de recuit spécifique pour une amplification PCR est appelée machine PCR ordinaire, qui est également une machine PCR traditionnelle. Si vous souhaitez l'utiliser pour différentes températures de recuit, vous devez l'exécuter plusieurs fois.
Les machines PCR ordinaires sont principalement utilisées dans la recherche scientifique, l'enseignement, la médecine clinique, l'inspection, la quarantaine, etc.
②Instrument PCR dégradé
L'amplification PCR unique peut définir une série de différentes conditions de température de recuit (généralement 12 gradients de température) appelée instrument PCR à gradient. Différents fragments d'ADN ont différentes températures d'hybridation optimales.En définissant une série de températures d'hybridation en gradient pour l'amplification, l'amplification PCR unique peut sélectionner la température d'hybridation la plus appropriée avec un niveau d'expression élevé pour une amplification efficace.
L'instrument de PCR à gradient est principalement utilisé pour étudier l'amplification d'une température d'hybridation de l'ADN inconnue, ce qui permet d'économiser du temps et de l'argent. Il peut également être utilisé comme une PCR ordinaire sans définir de dégradé. L'instrument PCR à gradient est principalement utilisé dans la recherche scientifique, les établissements d'enseignement, l'inspection, la quarantaine, etc.
③Machine PCR in situ
La PCR consiste à extraire l'ADN des cellules ou des tissus pour une réaction d'amplification génique, tandis que la PCR in situ consiste à maintenir l'intégrité des cellules ou des tissus, à faire pénétrer le système de réaction PCR dans les tissus et les cellules et à effectuer des gènes sur l'emplacement de l'ADN cible de la cellule. Amplification. Non seulement l'ADN cible peut être détecté, mais également le type de cellule dans lequel l'ADN cible existe, ce qui est plus propice à l'exploration de la relation entre l'ADN cible et la cellule.
L'instrument PCR in-situ est principalement utilisé pour : (1) Détecter des fragments de gènes exogènes, augmenter le taux de détection, en se concentrant sur l'inspection des infections virales, telles que le VIH, le VPH, le VHB, le CMV, etc. distribution des agents pathogènes dans le corps Loi (3) Fragments de gènes endogènes, tels que les maladies monogéniques humaines, les gènes recombinants, les chromosomes transloqués, les fragments d'ARNm d'Ig, les fragments d'oncogènes, etc. (4) Détection de gènes introduits (5) Détection de maladies génétiques telles que la -thalassémie.
④Instrument de PCR quantitative fluorescente en temps réel
Le système d'acquisition de signaux fluorescents et le système d'analyse et de traitement informatique sont ajoutés sur la base de la conception d'instrument PCR ordinaire pour former un instrument PCR avec fonction quantitative de fluorescence. Le principe de l'amplification PCR est le même que celui de l'amplification PCR ordinaire.Les amorces ajoutées lors de l'amplification PCR sont marquées avec des isotopes, de la fluorescéine, etc., et les amorces et les sondes fluorescentes sont utilisées pour se lier spécifiquement à la matrice en même temps pour amplification. Le résultat amplifié est connecté au système informatique d'analyse et de traitement via le signal d'acquisition en temps réel du système d'acquisition de signal de fluorescence, et la sortie de résultat quantifiée en temps réel est obtenue.
Les machines de PCR quantitative à fluorescence sont divisées en monocanal, double canal et multicanal. Lorsqu'une seule sonde fluorescente est utilisée pour le marquage, utilisez un seul canal ; lorsqu'il y a plusieurs marqueurs fluorescents, utilisez plusieurs canaux. Un seul canal peut également détecter des marqueurs multi-fluorescence et des produits d'expression de gène cible, car une seule quantité d'amplification de gène cible peut être détectée à la fois, et plusieurs amplifications sont nécessaires pour détecter la quantité de différents fragments de gène cible. Les multicanaux sont propices à la PCR multiplexe et réalisent la fonction de détection de plusieurs gènes cibles à la fois.
L'instrument de PCR quantitatif à fluorescence est principalement utilisé dans les tests médicaux cliniques, la recherche et le développement en biomédecine, l'industrie alimentaire, les instituts de recherche scientifique, etc. La technologie de détection quantitative par fluorescence présente de nombreux aspects du diagnostic clinique, se concentrant principalement sur le diagnostic clinique de maladies causées par divers agents pathogènes, tels que les hépatites, les maladies vénériennes, les maladies liées aux soins prénatals et postnatals et la tuberculose.